New Tech potpuno automatska mašina za ekstrakciju i detekciju nukleinskih kiselina

Pet snaga:
● Instrument konfigurisan sa ekstrakcijom nukleinske kiseline i korakom prečišćavanja
● Instrument konfigurisan sa ultrazvučnim modulom za ekstrakciju
● Instrument je konfigurisan sa potpuno automatskim
● Instrument konfigurisan sa promenljivim temperaturnim pojačanjem
● Instrument je konfigurisan sa potpuno zatvorenim kompletom reagensa

1. Da li reagense za detekciju nukleinske kiseline treba ekstrahovati i pročistiti?
Princip detekcije nukleinske kiseline je sljedeći: pod djelovanjem prajmera, DNK polimeraza se koristi za amplifikaciju lančane reakcije na šablonskoj DNK/RNA (koja zahtijeva obrnutu transkripciju NA), a zatim se detektuje količina oslobođenog fluorescentnog signala za određivanje da li uzorak sadrži nukleinsku kiselinu (DNK/RNA) patogena koji se otkriva.

1)Uzorci koji nisu ekstrahovani ili pročišćeni mogu sadržavati mnoge komponente koje utiču na konačni rezultat: nukleazu (koja može otopiti ciljnu nukleinsku kiselinu i uzrokovati lažno negativan), proteazu (koja može smanjiti DNK polimerazu i uzrokovati lažno negativnu), teški metal sol (koja dovodi do inaktivacije sintaze i uzrokuje lažno pozitivan), previše kiseli ili previše alkalni PH (što može uzrokovati neuspjeh reakcije), nepotpuna RNA (što dovodi do neuspjeha lažno negativne reverzne transkripcije).

2) Neke uzorke je teško direktno amplificirati: Gram-pozitivne i neke parazite, zbog njihovih debelih staničnih zidova i drugih struktura, ako ne prođu kroz proces ekstrakcije i pročišćavanja nukleinske kiseline, komplet bez ekstrakcije može propasti za takve uzorci.

Stoga se preporučuje odabir testnog kompleta ili instrumenta koji je konfigurisan za korak ekstrakcije nukleinske kiseline.

2. Hemijska ekstrakcija ili fizička ultrazvučna fragmentacija?
Uopšteno govoreći, hemijska ekstrakcija se može primeniti na većinu prethodnog tretmana i prečišćavanja.Međutim, kod gram-pozitivnih bakterija debelih stijenki i nekih parazita, također je slučaj da kemijska ekstrakcija ne može dobiti učinkovite šablone nukleinskih kiselina, što rezultira lažno negativnom detekcijom.Osim toga, hemijska ekstrakcija često koristi jake agense, ako eluiranje nije temeljito, lako je uvesti jake alkalije u reakcioni sistem, što rezultira netačnim rezultatima.

Ultrazvučna fragmentacija koristi fizičko drobljenje, koje je uspješno koristio GeneXpert, vodeće poduzeće u polju POCT za ljudsku upotrebu, i ima apsolutnu prednost u ekstrakciji nukleinske kiseline nekih složenih uzoraka (kao što je Mycobacterium tuberculosis).

Zbog toga se preporučuje odabir testnog kompleta ili instrumenta koji je konfigurisan sa korakom ekstrakcije nukleinske kiseline.a optimalno je ako postoji ultrazvučni modul za ekstrakciju.

3. Ručni, poluautomatski i potpuno automatski?
Ovo je problem cijene rada i efikasnosti rada.Trenutno bolnice za kućne ljubimce nemaju dovoljno osoblja, a ekstrakcija i detekcija nukleinske kiseline je posao koji zahtijeva određene vještine i iskustvo.Nema sumnje da je potpuno automatska mašina za ekstrakciju i detekciju nukleinskih kiselina savršen izbor.

4. Pojačavanje konstantne temperature ili promjenjivo temperaturno pojačanje?
Reakcija amplifikacije je veza za detekciju nukleinske kiseline, a profesionalna tehnologija uključena u ovu vezu je složena.Grubo govoreći, enzimi se koriste za amplifikaciju nukleinske kiseline.U procesu amplifikacije detektuje se pojačani fluorescentni signal ili ugrađeni fluorescentni signal.Uopšteno govoreći, što se ranije pojavi fluorescentni signal, to je veći sadržaj ciljnog gena u uzorku.

Amplifikacija s konstantnom temperaturom je amplifikacija nukleinske kiseline na fiksnoj temperaturi, dok je amplifikacija s promjenjivom temperaturom ciklička amplikacija striktno prema denaturaciji-žarenju-ekstenziji.Vrijeme pojačanja konstantne temperature je provedeno, dok na vrijeme amplifikacije varijabilne temperature u velikoj mjeri utiče brzina porasta i pada temperature instrumenta (trenutno su mnogi proizvođači bili u mogućnosti da urade 40 ciklusa pojačanja za oko 30 minuta).

Ako su laboratorijski uslovi dobri i zoniranje strogo, razumno je reći da razlika u tačnosti između njih neće biti velika.Međutim, promjenjiva temperaturna amplifikacija će sintetizirati više proizvoda nukleinske kiseline u relativno kraćem vremenu.Za laboratorije bez strogog zoniranja i stručnog obučavanja osoblja, rizik od curenja aerosola nukleinske kiseline će biti veći, lažno pozitivan se javlja kada dođe do curenja, a što je izuzetno teško eliminirati.

Osim toga, amplifikacija s konstantnom temperaturom je također sklonija nespecifičnoj amplifikaciji kada je uzorak složen (relativna temperatura reakcije je niža, a što je viša temperatura ekstenzije, to je bolja specifičnost vezivanja prajmera).

Što se tiče trenutne tehnologije, varijabilno pojačanje temperature je pouzdanije.

5. Kako izbjeći rizik od curenja produkata amplifikacije nukleinske kiseline?
Trenutno, mnogi proizvođači biraju PCR epruvetu tipa žlijezde kao reakcijsku cijev nukleinske kiseline, koja je zapečaćena trenjem, a temperaturna denaturacija u promjenjivoj temperaturnoj denaturaciji u PCR amplifikaciji promjenjive temperature doseže 90 stepeni.
Celzijus .Ponovljeni proces ekspanzije sa toplotom i kontrakcije sa hladnoćom je veliki izazov za zaptivanje PCR cevi, a PCR epruveta tipa žlijezde relativno je lako izazvati curenje.

Poželjno je usvojiti reakciju sa potpuno zatvorenim kompletom/cijevom kako bi se izbjeglo curenje produkta reakcije.Bilo bi savršeno kada bi se mogao izraditi potpuno zatvoren komplet za ekstrakciju i detekciju nukleinske kiseline.

Dakle, nova potpuno automatska mašina za ekstrakciju i detekciju nukleinskih kiselina New Tech-a ima gornjih pet optimalnih izbora.